ارزیابی فعالیت سلولازی در چند جدایه قارچ خاکزی

آنزیم‏ها ( کاتالیزورهای بیولوژیک) در مصارف بیوتکنولوژیک متعدد مانند کشاورزی ، صنایع غذایی ، تصفیه پساب‏ها و موارد دیگر کاربردهای گوناگونی دارند. آنزیم سلولاز از جمله آنزیم‏های مهم صنعتی می‏باشد که در کشاورزی برای تجزیه ضایعات لیگنوسلولزی، در صنایع غذایی برای کاهش سلولز مواد اولیه غذایی در صنایع کاغذسازی برای نرم کردن چوب و در مصارف مختلف دیگر کاربرد دارد. در تحقیق انجام شده در این پایان¬نامه ، فعالیت سلولازی تعدادی از جدایه های قارچ های خاکزی شامل جنسهای fusarium ، mucor ، absidia ، rhizomucor ، rhizopus ، trichoderma ، cuninghamella ، botrytis ، aspergillus و penicillium مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور از دو محیط کشت اختصاصی کاه گندم و کربوکسی متیل سلولز(cmc) برای تولید آنزیم سلولاز استفاده شد. چهار روز پس از تلقیح قارچ ها در محیط کشت به کمک معرف¬ها میزان قندهای احیا شونده حاصل از تجزیه سلولز و پروتئین های ترشحی قارچ مورد سنجش قرار گرفتند. نمونه گیری هر سه روز یک بار و به مدت یک ماه انجام شد و نتایج حاصل با نرم افزار sas تجزیه و تحلیل شد. نتایج نشان داد که از بین تمامی ایزوله های مورد بررسی در محیط کاه گندم بیشترین میزان تولید قند احیا شونده مربوط به ایزوله های trichoderma harzianum، aspergillus terreus، penicillium digitatum و بیشترین میزان تولید پروتئین های ترشحی مربوط به ایزوله های trichoderma longibrachiatumو fusarium oxysporum می باشد. همچنین در محیط کربوکسی متیل سلولز(cmc) بیشترین میزان تولید قند احیا شونده مربوط به ایزوله های trichoderma harzianum، aspergillus terreus ، penicillium digitatum و fusarium solani و بیشترین میزان تولید پروتئین های ترشحی مربوط به ایزوله های trichoderma longibrachiatum و aspergillus terreus می باشد. در بخش دیگر تحقیق ، تأثیرph روی فعالیت سلولازی ایزوله های برتر مورد بررسی قرار گرفت. بیشترین تولید قندهای احیا شونده و تولید پروتئین های ترشحی درph های 5 و 6 در هر دو محیط کاه گندم و کربوکسی متیل سلولز(cmc) مشاهده شد. در ادامه مطالعات ، آنزیم‏های سلولاز مترشحه توسط ایزوله های برتر درمحیط ، با استفاده از غلظت هشتاد درصد نمک سولفات آمونیوم و دیالیز کردن تغلیظ شدند. پروتئین های حاصل از تغلیظ محیط کشت برای بررسی ph و دمای بهینه فعالیت آنزیم و همچنین بررسی خصوصیات الکتروفورتیک آنزیم های سلولاز، مورد استفاده قرار گرفتند. نتایج بررسی ph و دمای بهینه فعالیت آنزیم های استخراجی از ایزوله های برتر نشان داد که در اکثر این آنزیم ها بیشترین فعالیت مربوط به ph های 4 تا 5 و دماهای 35 تا 50 درجه سانتیگراد می باشد. همچنین وزن مولکولی سلولاز های تولیدی در ایزوله trichoderma longibrachiatum، 35 و50 کیلودالتون، در ایزوله trichoderma harzianum، 40و50 کیلودالتون، در ایزوله aspergillus terreus، 28 و 66 کیلودالتون، در ایزوله penicillium digitatum، 45و 60 کیلودالتون، در ایزوله fusarium oxysporum، 25 و66 کیلودالتون و در ایزوله fusarium solani، 50 کیلودالتون مشاهده شد.